對于樣品的定量分析而言，不論所采取的檢測手段是紫外-可見分光光度法、熒光光度法、紅外光度法等中的哪一種，其定量依據均是被測物濃度與儀器響應信號之間存在嚴格的正相關關系。

  那么，定量分析的前提就是需要用與被測物質相同的標準物質建立一把“具有濃度刻度的尺子”，即獲得標準物質濃度與響應信號之間的關系。

  內標法與外標法

  關于這把“尺子”如何建立，通常有“外標法”和“內標法”之分，本文將對這兩種方法進行分析、比較。

  外標法與內標法的區分，即表現為標準物質是否被添加進待測物質中進行測量。

  以可見分光光度法為例， 將一系列不同濃度的標準物質在相同條件下分別與試劑反應，并在分光光度儀中獲得有色產物對應的吸光度值（即儀器的響應信號），進而間接得到標準物質濃度（c）與吸光度（A）之間的相關關系（通常使用線性擬合，即A = kc + b），其表現形式如圖（1）所示，該曲線被稱為標準曲線或工作曲線。

  在定量未知樣品時，在相同條件下通過未知樣品與顯色試劑反應后得到的吸光度值，代入到標準曲線的公式中，則可得到未知樣品的濃度。

  外標法的特點及要求：

  ①操作簡單，計算方便，外標法不使用校正因子，適用于大批量試樣的快速分析。

  ②儀器隨著使用會有所變化，因此需要定期進行曲線校正；

  ③對樣品量的移取精度要求較高，否則造成分析誤差。

  在內標法中，是將一系列不同濃度的標準物質分別加入到被測樣品中形成混合樣品。

  以可見分光光度法為例，在相同條件下，將這些混合樣品分別與顯色試劑反應生成有色產物，進而間接得到混合樣品中標準物質濃度與吸光度之間的對應關系，其表現形式如圖（2）所示。將該線性曲線反向延長后，與橫坐標軸的交點的濃度絕對值，即為上述混合樣品中未知樣品的濃度。

  該方法主要用于樣品基質復雜、干擾組分較多的未知樣品定量分析。

  內標法的特點及要求：

  ①內標法的準確性較高，操作條件和進樣量的稍許變動對定量結果的影響不大。

  ②內標法的缺點是操作程序相對煩瑣，每次分析時內標物和試樣都要準確稱量，不適合大批量試樣的快速分析，有時尋找合適的內標物也有困難。

 
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